Resultados preliminares del perfeccionamiento del DAVIH-AgP24 con el empleo del sistema de amplificación biotina-tiramina/estreptavidina-peroxidasa / Preliminary results of DAVIH-AgP24 with the biotin-tiramyne/streptavidine-peroxidase amplification system

Se modificó el ELISA DAVIH-Ag P24 con la introducción de la disociación por calor de las muestras de plasma y el empleo de un sistema de amplificación biotina-tiramina/estreptavidina-peroxidasa, para incrementar su sensibilidad. Se determinó la repetibilidad interensayo en el DAVIH-Ag P24 amplificado. Se evaluaron 32 muestras de plasma de individuos infectados por el VIH-1 en 3 categorías clínicas (caso SIDA, asintomßticos y con infecciones oportunistas menores). En la determinación de la repetibilidad interensayo se obtuvo un coeficiente de variación entre 4 y 10,3 por ciento. Con el DAVIH-Ag P24 amplificado se incrementó el nivel de detección de P 24 hasta 0,5 pg/mL. El DAVIH-Ag P24 amplificado alcanzó 66 por ciento de sensibilidad, mientras que el DAVIH-Ag P24 obtuvo 31 por ciento. Este estudio preliminar permitió demostrar que la incorporación de las nuevas modificaciones al sistema DAVIH-Ag P24 amplificado logró aumentar los niveles de detección de P24 y ganar en sensibilidad(AU)

ELISA DAVIH-Ag p24 was modified by introducing heat dissociation of plasma samples and a tyramine/streptavidine-peroxidase amplification system, with the objective of increasing sensitivity. Between-assay repeatability was determined in amplified DAVIH-Ag p24. Thirty two plasma samples from HIV-1-infected individuals classified in three clinical categories (AIDS case, asymptomatic and minor opportunistic infections) were evaluated. The variation coefficient ranged 4-10.3 percent in between-assay repeatability. With the amplified DAVIH-p24 Ag, the p24 antigen detection level increased to 0.5 pg/mL. Amplified DAVIH-p24 Ag reached 66 percent sensitivity whereas standard DAVIH-p24 Ag sensitivity rate was 31 percent. This preliminary study proved that the introduction of new modifications in amplified DAVIH-p24 Ag managed to increase the p24 antigen detection levels and to gain sensitivity(AU)

Resultados preliminares del perfeccionamiento del DAVIH-AgP24 con el empleo del sistema de amplificación biotina-tiramina/estreptavidina-peroxidasa / Preliminary results of DAVIH-AgP24 with the biotin-tiramyne/streptavidine-peroxidase amplification system

Se modificó el ELISA DAVIH-Ag P24 con la introducción de la disociación por calor de las muestras de plasma y el empleo de un sistema de amplificación biotina-tiramina/estreptavidina-peroxidasa, para incrementar su sensibilidad. Se determinó la repetibilidad interensayo en el DAVIH-Ag P24 amplificado. Se evaluaron 32 muestras de plasma de individuos infectados por el VIH-1 en 3 categorías clínicas (caso SIDA, asintomßticos y con infecciones oportunistas menores). En la determinación de la repetibilidad interensayo se obtuvo un coeficiente de variación entre 4 y 10,3 por ciento. Con el DAVIH-Ag P24 amplificado se incrementó el nivel de detección de P 24 hasta 0,5 pg/mL. El DAVIH-Ag P24 amplificado alcanzó 66 por ciento de sensibilidad, mientras que el DAVIH-Ag P24 obtuvo 31 por ciento. Este estudio preliminar permitió demostrar que la incorporación de las nuevas modificaciones al sistema DAVIH-Ag P24 amplificado logró aumentar los niveles de detección de P24 y ganar en sensibilidad.

ELISA DAVIH-Ag p24 was modified by introducing heat dissociation of plasma samples and a tyramine/streptavidine-peroxidase amplification system, with the objective of increasing sensitivity. Between-assay repeatability was determined in amplified DAVIH-Ag p24. Thirty two plasma samples from HIV-1-infected individuals classified in three clinical categories (AIDS case, asymptomatic and minor opportunistic infections) were evaluated. The variation coefficient ranged 4-10.3 percent in between-assay repeatability. With the amplified DAVIH-p24 Ag, the p24 antigen detection level increased to 0.5 pg/mL. Amplified DAVIH-p24 Ag reached 66 percent sensitivity whereas standard DAVIH-p24 Ag sensitivity rate was 31 percent. This preliminary study proved that the introduction of new modifications in amplified DAVIH-p24 Ag managed to increase the p24 antigen detection levels and to gain sensitivity.

Marcadores de progresión serológicos y celulares en pacientes cubanos infectados por VIH-1 / Serologic and cell markers for progression in Cuban HIV-infected patients

Se estudió el comportamiento de marcadores de progresión serológicos y celulares en un grupo de pacientes cubanos con infección por VIH-1 confirmada serológicamente. Se seleccionaron, al inicio, de forma aleatoria, 228 individuos en diferentes estadios clínicos. Se determinó en cada caso el nivel de anticuerpos contra la proteína de 24 kD del VIH-1 y se observó la evolución clínica durante 26,5 meses. Al comienzo del seguimiento, se comprobó que el 65 porciento de los pacientes con infecciones oportunistas menores y el 98 porciento de los enfermos con SIDA presentaron títulos bajos de anticuerpos anti p24 y que la tasa de progresión clínica fue significativamente mayor en el grupo de pacientes que entraron al estudio con titulaciones bajas o ausencia de anticuerpos anti p24 detectables. Al final del seguimiento, en 100 de los 228 pacientes inicialmente incluidos se realizó un estudio de corte transversal con la determinación de títulos de anticuerpos anti p24, detección de antigenemia p24 y conteo de subpoblaciones linfocitarias por citometría de flujo. Se observó correlación entre las pruebas serológicas, el conteo de células CD4 + y el estadio clínico. La disminución del título de anticuerpos anti p24 se comportó como un marcador precoz. Se señaló la utilidad del uso combinado de estos marcadores en el seguimiento clínico de nuestros pacientes

Caracterización biológica de aislamientos de VIH-1 en pacientes con una evolución clínica rápida

Se estudiaron las características biológicas de 11 cepas de VIH-1 aisladas de pacientes con rápida evolución clínica al sida. Los aislados virales se clasificaron según su cinética de replicación y tropimo celular, con estos criterios se observó que 8 de las cepas aisladas (72,7 %) resultaron de crecimiento rápido alto o lento bajo 3 y con tropismo preferencial a la estirpe linfocítica, como corresponde a los pacientes con sida, mientras 3 (27,3 %) tuvieron características de lenta baja 1. La citopatogenicidad de las cepas se estudió en la línea celular MT4 y se observó que la mayoría (72,7 %) resultó inductora de sincicios (IS), por lo que se comprobó relación in vivo e in vitro de las propiedades biológicas, no ocurrió así en 3 de los cultivos (27,3 %) que se comportaron como no inductores de sincicios.

The biological characteristics of 11 HIV-1 strains isolated from patients with a fast clinical evolution to AIDS were studied. The viral isolates were classified according to their replication kinetics and cell tropism. Taking into account these criteria, it was observed that 8 of the isolated strains (72,7 %) were of rapid high growth (RH) or slow low 3 (SL3) with preferential tropism to the lymphocytic stock, as it corresponds to AIDS patients. 3 (27,3 %) had characteristics of slow low 1 (SL1). The cytopatogenecity of the strains was studied in the MT4 celular line, and it was observed that most of them (72,7 %) were syncytium-inducing strains (SI), which allowed to prove the in vivo and in vitro relation of the biological properties. It was not so in 3 of the cultures (27,3 %) that behaved as non-syncytium inducers.

Caracterización biológica de aislamientos de VIH-1 en pacientes con una evolución clínica rápida / Biological characterization of HIV-1 isolates in patients with a rapid clinical evolution

Se estudiaron las características biológicas de 11 cepas de VIH-1 aisladas de pacientes con rápida evolución clínica al sida. Los aislados virales se clasificaron según su cinética de replicación y tropimo celular, con estos criterios se observó que 8 de las cepas aisladas (72,7 porciento) resultaron de crecimiento rápido alto o lento bajo 3 y con tropismo preferencial a la estirpe linfocítica, como corresponde a los pacientes con sida, mientras 3 (27,3 porciento) tuvieron características de lenta baja 1. La citopatogenicidad de las cepas se estudió en la línea celular MT4 y se observó que la mayoría (72,7 porciento) resultó inductora de sincicios (IS), por lo que se comprobó relación in vivo e in vitro de las propiedades biológicas, no ocurrió así en 3 de los cultivos (27,3 porciento) que se comportaron como no inductores de sincicios (AU)

Evaluación de un sistema de Western Blot (DAVIH-BLOT) para la confirmación de anticuerpos al VIH-1 / Evaluation of am Western blot system (DAVIH-BLOT) to confirm HIV-1 antibodies

Se reporta la evaluación del sistema DAVIH-BLOT (Laboratorios DAVIH, Cuba) frente a los paneles de proficiencia enviados al Laboratorio Nacional de Referencia del SIDA, por la Organización Mundial de la Salud (OMS), para el aseguramiento de la calidad en el diagnóstico de anticuerpos al VIH en los años 1989, 1991 y 1993, así como la comparación del sistema con los de las firmas Du Pont y Diagnostic Pasteur en un grupo de 467 sueros positivos por ELISA. En el estudio de las muestras de la OMS el sistema demostró ser altamente sensible y específico. Al compararlos con los estuches HIV-1 Western blot IgG versión 1.2 (DuPont company, EE.UU.) y New LAV-blot 1 (Diagnostic Pasteur, Francia) tuvo una coincidencia del 100 y 97 por ciento, respectivamente

Evaluación de un sistema de Western Blot (DAVIH-BLOT) para la confirmación de anticuerpos al VIH-1 / Evaluation of am Western blot system (DAVIH-BLOT) to confirm HIV-1 antibodies

Se reporta la evaluación del sistema DAVIH-BLOT (Laboratorios DAVIH, Cuba) frente a los paneles de proficiencia enviados al Laboratorio Nacional de Referencia del SIDA, por la Organización Mundial de la Salud (OMS), para el aseguramiento de la calidad en el diagnóstico de anticuerpos al VIH en los años 1989, 1991 y 1993, así como la comparación del sistema con los de las firmas Du Pont y Diagnostic Pasteur en un grupo de 467 sueros positivos por ELISA. En el estudio de las muestras de la OMS el sistema demostró ser altamente sensible y específico. Al compararlos con los estuches HIV-1 Western blot IgG versión 1.2 (DuPont company, EE.UU.) y New LAV-blot 1 (Diagnostic Pasteur, Francia) tuvo una coincidencia del 100 y 97 por ciento, respectivamente(AU)

Normalización de un western-blot para el estudio de sobrenadantes y liquidos asciticos de hibridomas de ratón anti-VIH / Standarization of western blot for studying supernatants and ascitic fluids of anti-HIV murine hybridomas

Se utilizó el sistema conservatorio de detección de anticuerpos al VIH-1 "DAVIH-blot", basado en la inmunoelectrotransferencia y desarrollado en nuestros laboratorios como sistema de confirmación para sueros humanos, como sistema de referencia para normalizar una variante adecuada para el estudio de sueros de ratones hiperinmunes, líquidos ascíticos y sobrenadante de cultivo de hibridomas de ratón. Se compararon las siguientes variaciones de la etapa inmunológica: soluciones amortiguadoras para la dilución de las muestras y conjugados, soluciones bloqueadoras, temperatura y tiempo de incubación, y se determinaron las condiciones experimentales óptimas: usar como solución amortiguadora para la dilución de las muestras y conjugados, una solución de Tris-0,02M-NaCl0,5 con Tween-20 al 0,05 %(TNT), no usar solucion bloqueadora antes de la adición del conjugado e incubar el antisuero conjugado 1 hora a 37 -C

Normalización de un western-blot para el estudio de sobrenadantes y liquidos asciticos de hibridomas de ratón anti-VIH / Standarization of western blot for studying supernatants and ascitic fluids of anti-HIV urine hybridomas

Se utilizó el sistema conservatorio de detección de anticuerpos al VIH-1 "DAVIH-blot", basado en la inmunoelectrotransferencia y desarrollado en nuestros laboratorios como sistema de confirmación para sueros humanos, como sistema de referencia para normalizar una variante adecuada para el estudio de sueros de ratones hiperinmunes, líquidos ascíticos y sobrenadante de cultivo de hibridomas de ratón. Se compararon las siguientes variaciones de la etapa inmunológica: soluciones amortiguadoras para la dilución de las muestras y conjugados, soluciones bloqueadoras, temperatura y tiempo de incubación, y se determinaron las condiciones experimentales óptimas: usar como solución amortiguadora para la dilución de las muestras y conjugados, una solución de Tris-0,02M-NaCl0,5 con Tween-20 al 0,05

(TNT), no usar solucion bloqueadora antes de la adición del conjugado e incubar el antisuero conjugado 1 hora a 37 -C